骨髓间充质干细胞体外诱导成软骨细胞的动态观察

背景：骨髓间充质干细胞向软骨细胞定向诱导时间报道不一，对诱导中细胞动态变化进行观察比较的研究较少。
　　目的：观察兔骨髓间充质干细胞诱导8，11，14，17，20 d向成软骨细胞定向分化的动态变化情况以及诱导成熟时间。
　　方法：穿刺新西兰大白兔股骨穿刺抽取骨髓，密度梯度离心法分离、培养骨髓间充质干细胞。传至第3代后予以含转化生长因子β1等成分的无血清诱导液定向向软骨细胞诱导。根据不同的诱导时间分成为5组：8d组、11 d组、14 d组、17 d组及20 d组。通过观察各组细胞形态、甲苯胺蓝染色结果、Ⅱ型胶原免疫组化结果、培养液内多聚蛋白聚糖含量，比较各实验组定向诱导为成软骨细胞的情况。
　　结果与结论：诱导8 d时细胞形态有较明显改变，14 d时具有明显的软骨细胞形态。诱导培养液在诱导4 d时即可检出少量多聚蛋白聚糖，在8 d时浓度出现明显升高，并保持缓慢升高至20 d。在14 d时，诱导的细胞爬片甲苯胺蓝染色可见异染颗粒；Ⅱ型胶原免疫组化明显阳性表现。提示单层高密度接种的骨髓间充质干细胞，在转化生长因子β1等因子作用下能定向诱导为软骨细胞，诱导早期即可能有少量细胞向成软骨细胞分化，8 d时初步具有软骨细胞的形态、功能特征，14 d时成为较成熟的软骨细胞；诱导过程中细胞保持较高的生物活性。