腺病毒介导的PML(NLS-)对大黄素引起的HL-60细胞存活的影响及其机制

目的 探讨PML(NLS-)对大黄素引起的人HL-60细胞凋亡的影响及其机制.方法 将构建成功的重组腺病毒Ad-PML(NLS-)和空载病毒Ad-KZ分别感染HL-60细胞,并设空白对照组.RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞PML(NLS-)基因mRNA和蛋白的表达水平；MTT法分析腺病毒感染各组经60μmol/L大黄素处理后的细胞的增殖能力；各组感染HL-60细胞经60 μmol/L大黄素处理后,FCM法分析细胞周期分布和凋亡率；并用RT-PCR法和Western blot法分别检测各组细胞凋亡相关基因C-MYC、BCL-2和BAX的mRNA及蛋白表达水平.结果 与空白对照组和空载病毒组比较,RT-PCR和Western blot结果显示,Ad-PML(NLS-)组细胞内的PML(NLS-)表达水平明显增高.各组细胞经大黄素处理后,MTT结果显示,感染Ad-PML(NLS-)的HL-60细胞增殖能力明显提高；FCM结果显示,感染Ad-PML(NLS-)的HL-60细胞处于G1期细胞比例降低,S期细胞比例增高(P＜0.05),且凋亡率降低(P＜0.05)；细胞内BCL-2和C-MYC基因mRNA的转录和蛋白表达水平增高,BAX基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均下降.结论 过表达PML(NLS-)基因能够促进经过60 μmol/L大黄素处理的HL-60细胞的增殖,可能通过上调BCL-2和C-MYC基因的表达、下调BAX基因的表达抑制细胞凋亡.