内含肽介导的重组人干扰素α2a的原核表达及其生物学活性

目的 原核表达内含肽介导的重组人干扰素α2a(rhIFNα2a)融合蛋白,并检测其生物学活性.方法 以质粒pBV220-IFN-α2a为模板PCR扩增rhIFNα2a基因,将其插入原核表达载体pTWIN1的内含肽Ssp DnaB基因下游的多克隆位点,构建重组表达质粒pTWIN1-rhIFNα2a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物进行SDSPAGE及Western blot分析,并对裂菌上清的生物学活性进行测定.结果 双酶切及测序结果显示,融合蛋白基因已克隆入表达载体中；rhIFNα2a蛋白的相对分子质量约44 300,表达量占全菌总蛋白的30％,在裂菌上清中的表达量占目的蛋白的25％,可与小鼠抗hIFNα单克隆抗体特异性结合；裂菌上清中rhIFNα2a蛋白的活性为5.57×107 IU/ml,表明该重组蛋白具有良好的IFN抗病毒活性.结论 已成功在大肠杆菌BL21 (DE3)中表达了具有生物学活性的可溶性重组rhIFNd2a与内含肽Ssp DnaB融合蛋白,为大量生产IFNα2a提供了新的思路.