基于电阻抗分析的免疫层析试纸条定量检测大肠杆菌O157∶H7

为寻找食源性致病菌的快速定量检测方法,将阻抗技术和免疫层析技术相结合,研制一种双抗夹心免疫层析试纸条,探讨该试条电阻抗法定量检测大肠杆菌O157∶H7的可行性.采用具有良好导电性的聚苯胺标记大肠杆菌O157∶H7多克隆抗体,硝酸纤维素膜(NC膜)作为固相支撑物.通过阻抗-时间法表征层析过程中试条阻抗的变化,确定免疫反应稳定时间.通过交流阻抗法研究样品的多频响应,确定最佳测试频率.根据免疫反应稳定后不同浓度大肠杆菌O157∶H7样品相对空白样品的阻抗改变率,来实现对大肠杆菌O157∶H7的定量检测.试验结果表明,滴加样品180 s后免疫反应达到平衡.当测试频率为1Hz时,试纸条的阻抗变化率与菌液浓度的对数值呈线性相关.线性检测范围是1.15×103～1.15×106 CFU/mL,决定系数R2为0.9616,最低检测限为7.08×102 CFU/mL(S/N=3),检测时间低于6 min.该方法灵敏度高,检测时间短,操作简单,可应用于大肠杆菌O157∶H7的快速定量检测,同时为其它食源性致病菌的定量检测提供参考.