分化抑制因子1对鼻咽癌细胞增殖的影响及其途径

目的 探讨分化抑制因子1(Id1)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 体外培养人鼻咽癌细胞NP69、CNE1.合成Id1小分子干扰RNA (siRNA),构建Id1表达载体并分别转染鼻咽癌细胞NP69、CNE1.收集Id1siRNA及对照质粒Scramble转染72h的NP69细胞(分别命名为NP69si-Id1、NP69-NC),pcDNA3.1-Id1及对照pcDNA3.1转染48h的CNE1细胞(分别命名为CNE1-Id1、CNE1 -Vector),采用RT-PCR及Western blotting检测Id1的表达情况.采用MTT法比较顺铂(DDP)对NP69si-Id1、NP69-NC和CNE1-Id1、CNE1 -Vector增殖的影响.采用CalcuSyn软件计算各组细胞对DDP的IC50值.将1μg/ml DDP与鼻咽癌细胞共同孵育24h后,采用Western blotting检测凋亡蛋白Caspase-3、Bax、Bad的表达及蛋白激酶B(Akt)Thr308和Ser473的磷酸化情况.结果 与NP69-NC比较,NP69si-Id1的Id1 mRNA和蛋白水平明显降低；与CNE1 -Vector比较,CNE 1-Id1的Id1 mRNA及蛋白水平明显升高.NP69si-Id1细胞对DDP的IC50值(0.207±0.008μμg/ml)明显低于NP69-NC(0.405±0.009μg/ml,P＜0.05),CNE1-Id1细胞对DDP的IC50值(0.671±0.012μg/ml)明显高于CNE1-Vector(0.445±0.008/ml,P＜0.05).Western blotting检测结果显示,与NP69-NC比较,NP69si-Id1的Caspase-3断裂带增多,Akt Thr308和Ser473磷酸化减少；与CNE1-Vector比较,CNE1-Id1的Caspase-3断裂带减少,Akt Thr308和Ser473磷酸化增加.结论 Id1可促进鼻咽癌细胞的生长,抵抗DDP诱导的细胞凋亡,其机制可能与增加Akt磷酸化有关.