促红细胞生成素对急性肾损伤微环境下骨髓间充质干细胞分化及分泌功能的影响

目的 观察经促红细胞生成素(EPO)干预后,体外模拟急性肾损伤(AKI)微环境下培养骨髓间充质干细胞(BM-MSC)的分化及分泌功能变化.方法 Percoll密度梯度离心联合贴壁培养法分离C57BL/6小鼠BM-MSC(mBM-MSC).构建缺血再灌注(I/R)诱导AKI小鼠模型,制作健康小鼠及I/R小鼠肾脏匀浆上清.取扩增3代的mBM-MSC分组培养:A组:含10％胎牛血清的低糖DMEM培养液培养；B组:健康小鼠肾脏匀浆上清干预；C组:I/R小鼠肾脏匀浆上清干预,体外模拟AKI微环境；D组:I/R小鼠肾脏匀浆上清+不同浓度EPO(1、5、10、50 U/ml)干预；培养1、3、5、7d.倒置显微镜观察细胞形态,透射电镜观察细胞超微结构,流式细胞仪检测细胞角蛋白18(CK18),酶联免疫吸附试验( ELISA)检测培养上清液中骨形态发生蛋白7(BMP-7)、肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)水平.结果 分离获得的P3-mBM-MSC高表达CD29和CD44,低表达CD34和CD45.与A、B组长梭形细胞相比,C组部分细胞出现椭圆形、短梭形、圆形外观,EPO干预可使细胞呈现鹅卵石样外观,且C、D组细胞的胞质内细胞器丰富,并可见微绒毛及桥粒.A、B组mBM-MSC内仅有极微量CK18表达,C、D组CK18阳性表达率显著高于A、B组(均P＜0.01),50 U/mlEPO干预5、7d后CK18表达量显著高于同时间点C组(5 d:35.22 ±4.04比8.72±0.38,7 d:42.00±5.39比13.20±1.14,均P＜0.01).A、B组上清液中均见有BMP-7、HGF、VEGF表达,两组间差异无统计学意义,C组表达量均显著低于A、B组(P ＜0.05或P＜0.01).结论 EPO干预可增强mBM-MSC的分化功能,并逆转其低分泌效应.