社区呼吸道感染肺炎链球菌对头孢妥仑的耐药机制研究

目的 研究头孢妥仑敏感性降低肺炎链球菌的耐药机制.方法 收集2009年1月至2010年1月来自全国各地10所教学医院的37株头孢妥仑最低抑菌浓度(MIC)≥1 mg/L的社区呼吸道感染肺炎链球菌作为研究组,并取6株头孢妥仑MIC≤0.5 mg/L的社区呼吸道感染肺炎链球菌作为对照组.采用微量肉汤稀释法测定菌株对11种抗菌药物的MIC.采用多重PCR法对所有菌株进行血清分型.采用PCR法扩增43株菌的pbp2b、pbp1a、pbp2x和murM基因.用限制性内切酶进行pbp2b、pbp1a、pbp2x的指纹图谱分析.根据酶切试验分型结果,同一型的菌株挑选1～5个PCR产物送测序,测序结果与肺炎链球菌标准菌株R6比较以分析耐药菌株的青霉素结合蛋白(PBP)保守基序,特别是SXXK盒、SXN盒、KT(S)G盒的突变情况.结果 根据药敏试验结果将菌株分为3组:3株对青霉素敏感、头孢妥仑MIC值≤0.5 mg/L作为C1组；3株对青霉素中介、头孢妥仑MIC值≤0.5 mg/L作为C2组；37株对青霉素中介,头孢妥仑MIC为1～4mg/L的为R组.R组的肺炎链球菌对左氧氟沙星、莫西沙星和万古霉素均敏感,对头孢呋辛、头孢克洛、阿奇霉素和克拉霉素均耐药,仅有8.2％和5.4％的菌株分别对阿莫西林-克拉维酸和头孢曲松敏感.37株R组菌株血清学分型结果35株为19F型,1株为14型,1株为19A型.C1组菌的PBP氨基酸保守基序与野生株R6相比无突变.C2组菌PBP氨基酸保守基序与R6株相比在PBP2B、PBP2X和PBP1A中均发生3点突变.R组菌株PBP氨基酸保守基序与R6株相比则在C2组突变的基础上增加了2～3个活性位点的突变.结论 PBP2B、PBP1A和PBP2X的突变与肺炎链球菌的头孢妥仑耐药性密切相关,特别是PBP2B的Ala618→Gly,PBP2X的Met339→Phe和Tyr595→Phe可能与头孢妥仑MIC升高相关.