人胰腺癌细胞系与大鼠背根神经节体外共培养的研究

目的 建立一种新的体外胰腺癌神经浸润( PNI)研究模型,并观察PNI过程中神经突的生长状况,以及胰腺癌细胞的增殖、凋亡和迁移情况.方法 取人胰腺癌细胞系MIA PaCa-2和大鼠背根神经节(DRG),于Matrigel胶中共培养,建立研究模型.倒置显微镜下观察胰腺癌细胞集落形成和DRG神经突生长情况以及胰腺癌细胞的迁移情况,并用Image-Pro Plus 5.0图像分析软件进行图像分析,计算神经突和胰腺癌细胞集落所占的面积.免疫细胞化学法检测胰腺癌细胞增殖细胞核抗原Ki-67的表达情况,计算胰腺癌细胞增殖指数,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测胰腺癌细胞的增殖情况.利用流式细胞仪检测胰腺癌细胞的凋亡率.结果 共培养24和72 h,MIA PaCa-2/DRG共培养组的细胞集落面积分别为176.67±5.57和242.83±4.92,明显大于MIA PaCa-2细胞单独培养组(分别为151.17±5.98和182.50 ± 5.39,均P＜0.01)；MIA PaCa-2/DRG共培养组的神经突面积分别为129.33±2.73和202.50 ±8.04,明显大于DRG单独培养组(分别为63.67 ±5.17和78.67 ±3.61,均P＜0.01).神经突有明显向胰腺癌细胞集落方向生长的趋势,而神经突与胰腺癌细胞集落接触后,胰腺癌细胞则沿神经突生长的方向逆向迁移,最终到达DRG周围,出现类似PNI的表现.MTT与免疫细胞化学实验结果均表明,上清液培养组胰腺癌细胞的增殖远比普通培养基培养组活跃.流式细胞仪检测结果表明,上清液培养组胰腺癌细胞凋亡率为2.46％,明显低于普通培养基培养组(4.89％,P＜0.01).结论 MIA PaCa-2/DRG共培养模型成功构建,有助于胰腺癌PNI的研究.神经细胞与胰腺癌细胞的相互作用在胰腺癌的PNI过程中发挥重要作用.神经细胞与胰腺癌细胞可以相互促进对方的生长,并且胰腺癌细胞有沿神经突生长的方向逆向迁移的趋势.