弱化二氢叶酸还原酶基因增进人神经生长因子β亚基在CHO细胞中的表达

目的 通过弱化二氢叶酸还原酶基因(Dihydrofolate reductase,DHFR)增进入神经生长因子β亚基(β-Human nerve growth factor,β-hNGF)在CHO细胞中的表达.方法 从质粒pUC18-β-NGF中扩增β-NGF基因,克隆至pMD18-T载体,构建克隆质粒β-hNGF/pMD18-T;经人工合成弱化SV40启动子与DHFR基因顺式表达元件,并插入pBudCE4.1质粒,构建质粒w-DHFR/pBudCE4.1；分别双酶切质粒β-hNGF/pMD 18-T和w-DHFR/pBudCE4.1后连接,转化大肠杆菌Top10’,构建重组表达质粒β-hNGF/w-DHFR/pBudCE4.1,转染CHO-DHFR后,筛选阳性细胞克隆,ELISA法检测阳性CHO细胞株表达β-NGF的水平,鸡背根神经节增殖法检测重组β-NGF的生物学活性.结果 重组表达质粒β-hNGF/w-DHFR/pBudCE4.1经酶切和测序证明构建正确；共获得5株表达β-hNGF的CHO细胞株,且表达的β-NGF能使神经节出现明显的神经纤维,表达量为0.1 μg/μl.结论 通过弱化SV40启动子和DHFR基因,在CHO细胞中成功表达了β-hNGF基因,表达量增加且具有生物学活性.