H1N1亚型流感病毒M1基因重组杆状病毒的构建及鉴定

目的 构建H1N1亚型流感病毒M1基因重组杆状病毒,并进行鉴定.方法 PCR扩增H1N1亚型流感病毒(A/PR/8/34)全长M1基因,与pFastBacdual(pFBD)载体连接,构建重组杆状病毒转移载体pFBD-M1,转化含有Bacimd和Helper 质粒的DH10Bac感受态细胞,获得骨架质粒rBacmid-M1,将其转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-M1.采用噬斑形成法检测病毒滴度,PCR法检测M1基因的插入,间接免疫荧光、Western blot和ELISA法检测M1蛋白的表达.结果 重组杆状病毒骨架质粒rBacmid-Ml经PCR鉴定证实构建正确；第3代rBac-M1病毒滴度为3×108 pfu/ml;感染rBac-Ml的sf9细胞经PCR扩增可见3 300 bp的条带,间接免疫荧光检测可见特异性绿色荧光,Western blot检测可与鼠抗流感病毒(PR8)和鼠抗M1蛋白(PR8)多克隆抗体发生特异性反应,ELISA检测M1蛋白可与鼠抗流感病毒(PR8)多克隆抗体发生特异性反应,具有良好的反应原性.结论 已成功构建了H1N1亚型流感病毒M1基因重组杆状病毒,为进一步研究流感病毒M1的功能及新型流感疫苗开发奠定了基础.