γ分泌酶抑制剂阻断Notch1信号通路对人结肠癌耐药细胞化疗敏感性的影响

目的 探讨应用γ分泌酶抑制剂(Gamma-secretase inhibitor.GSI)阻断Notchl信号通路后对人结肠癌耐药细胞株SW480/L-OHP化疗敏感性的影响.方法 应用人结肠癌细胞系SW480,以反复诱导、逐渐递增奥沙利铂(L-OHP)浓度的方法,体外构建耐药细胞株SW480/L-OHP.采用CCK-8法检测细胞株对L-OHP的耐药指数,RT-PCR法检测survivin、notch1、hes1、cyclinD1基因mRNA的转录,Western blot检测Notch1和Hes1蛋白的表达.将耐药细胞分成对照组、L-OHP组(3.0μmol/L)、GSI组(10 μmol/L)和GSI+ L-OHP组,分别处理后,检测各组细胞的抑制率、凋亡率及survivin、notch1、hes1、cyclinD1基因mRNA的转录水平和Notch1、Nicd、Hes1蛋白的表达水平.结果 与SW480亲本细胞相比,SW480/L-OHP细胞中survivin、notch1、hes1和cyclinDl基因mRNA转录水平及Notch1和Hes1蛋白表达水平均上调.GSI组耐药细胞的增殖受到抑制,GSI+L-OHP组抑制作用更明显；GSI组耐药细胞survivin、hes1、cyclinD1基因mRNA转录水平下调,Nicd和Hes1蛋白表达水平下调,GSI+L-OHP组下调更明显.结论 GSI通过阻断Notch1胞内段Nicd的释放,影响下游Hes1基因和蛋白的表达,从而抑制SW480/L-OHP细胞增殖,提高其化疗敏感性；且与L-OHP联合使用具有协同作用.