结核分枝杆菌CFP10-PPE68融合基因原核表达质粒的构建及表达

目的 构建结核分枝杆菌CFP10-PPE68融合基因原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达融合蛋白.方法 以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,采用PCR法分别扩增CFP10和PPE68基因,基因拼接法扩增CFP10-PPE68融合基因,克隆至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pET-32a(+)-CFP10-PPE68,转化大肠杆菌BL21( DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果 重组表达质粒pET-32a( +)-CFP10-PPE68经双酶切和测序证明构建正确；表达的融合蛋白相对分子质量为68 630,表达量为菌体总蛋白的41.8％,主要以可溶性形式存在,且可与PPE68 rBCG免疫兔血清发生特异性反应.结论 成功构建了结核分枝杆菌CFP10-PPE68融合基因原核表达质粒,并在大肠杆菌BL21( DE3)中表达了融合蛋白,为其在结核病血清学诊断中的应用奠定了基础.