分离人外周血单个核细胞和粒细胞一步法与两步法比较

目的比较Ficoll一步法和Ficoll两步法的体外分离效果,优化分离人外周血单个核细胞(PBMC)和粒细胞的方法和条件。方法取EDTA抗凝血,分别用Ficoll一步法和Ficoll两步法分离PBMC和粒细胞,用血细胞分析仪进行细胞计数和分类,计算回收率和纯度,评价两种方法的分离效果。结果一步法获得PBMC回收率(82.38±13.57)%,粒细胞回收率(36.22±19.46)%,PBMC纯度(75.5±16.26)%,粒细胞纯度(58.2±27.11)%,而二步法获取PBMC回收率(32.93±51.81)%,粒细胞回收率(1.01±2.25)%,PBMC纯度(42.7±45.72)%,粒细胞纯度(3.2±7.12)%。经卡方检验,Ficoll一步法和Ficoll两步法的分离回收率χ2=21.06,纯度χ2=10.892两者均有统计学差异(P<0.01)。结论 Ficoll一步法获得PBMC和粒细胞回收率和纯度明显高于Ficoll两步法,同时,Ficoll一步法分离过程简单化、有利缩短工作时间、提高工作效率,与Ficoll两步法相比除了简化操作外,也减少了耗材,降低了试验成本,对同时分离人PBMC和粒细胞较适用。