蜂胶及其主要成分乔松素对载脂蛋白E基因敲除鼠动脉粥样硬化的抑制作用

目的在家兔做动物模型取得初步数据的基础上,本研究使用公认的自发产生动脉粥样硬化(As)的载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)鼠喂以高脂食物,探讨蜂胶及其主要黄酮成分乔松素对As的作用。方法蜂胶为泰山松柏蜂胶,根据本实验室常规方法提取制备蜂胶乙醇浸膏(EEP),EEP中总黄酮含量为30.5%,乔松素以硅胶柱层析、半制备液相色谱法制备,熔点测定和质谱法鉴定。8周龄雄性C57BL/6J背景的ApoE-/-鼠,平均体重22 g,购于北京大学医学院动物实验中心。饲以含脂肪21%、胆固醇0.15%的饲料。EEP组为70%乙醇蜂胶浸膏160 mg/(kg.d),另分乔松素低剂量组(10 mg/kg)、高剂量组(20mg/kg)和联合用药组(乔松素20 mg/kg和辛伐他汀粉剂10 mg/kg)。每天1次,连续14周。全自动生化分析仪检测血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)。硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO);酶联免疫双抗体夹心法检测内皮素(ET)和血管内皮生长因子(VEGF)。小鼠心脏OCT包埋,冰冻切片,油红O染色,观察主动脉根部粥样硬化斑块。小鼠主动脉弓到髂动脉分叉的整条主动脉,油红O染色,观察主动脉内表面粥样硬化斑块,图像系统分析斑块大小。免疫组织化学染色法观察As斑块VEGF表达。结果与对照组相比,EEP降低了TG、TC、LDLC和HDLC含量,增加血清NO含量,降低ET水平;油红O染色显示EEP组主动脉斑块面积显著降低,斑块面积与整条动脉内表面积的比值降低了16.15%,主动脉根部斑块面积与管腔横截面面积的比值降低了20.93%,免疫组织化学结果表明EEP降低了血管内皮生长因子(VEGF)的表达,血清VEGF含量也相应降低。析因分析结果显示,乔松素或辛伐他汀钠单一药物预处理组与未用药物组比较,均降低了血清中TG、TC、HDLC和LDLC的含量,升高了NO含量,降低了ET和VEGF的含量,减少了As斑块的面积。乔松素和辛伐他汀联合组与单一药物组比较,血清中TG、TC、HDLC和LDLC的含量均降低,NO升高,血清ET降低,血浆VEGF和斑块内VEGF均降低,粥样硬化斑块面积减少。