星形胶质细胞纯化方法改良及脂多糖刺激后一氧化氮系统的表达

目的对BALB/c小鼠大脑皮层星形胶质细胞分离纯化的方法进行改良和优化,并进一步研究经脂多糖(LPS)刺激后其一氧化氮(NO)的产生及一氧化氮合酶(NOS)表达情况。方法星形胶质细胞采用温和胰酶与定轨摇床振荡相结合的方法进行分离,采用抗GFAP抗体鉴定其纯度;再采用LPS刺激分离培养的星形胶质细胞,检测培养上清中NO的产生及3种NOS表达情况。结果体外培养的星形胶质细胞经免疫荧光方法鉴定,纯度达97%;LPS刺激后星形胶质细胞合成NO的量明显增多,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达量明显上调。结论经温和胰酶消化和振荡相结合的方法,可以获得高纯度的原代培养小鼠大脑皮质星形胶质细胞;星形胶质细胞经LPS刺激后可诱导产生大量的NO及高水平表达iNOS。