刺梨ISSR-PCR反应体系的建立和优化

以刺梨为试材,对影响ISSR-PCR扩增结果的主要影响因素包括Mg2+、Taq DNA聚合酶、dNTPs、引物、模版DNA的浓度及引物退火温度进行了优化筛选。确立了适合刺梨ISSR-PCR分析的最佳反应体系,即20μL反应体系中各组分浓度分别为:10×buffer 2.0μL,Mg2+1.875 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U,dNTPs 0.1 mmol/L,引物2.0μmol/L,模板DNA 20 ng。PCR扩增程序:94℃预变性5 min,94℃变性1 min,48℃退火温度45 s,72℃延伸1 min,34个循环,72℃后延伸6 min。利用优化体系对3个刺梨品种进行体系稳定性检测,结果表明该优化体系的重复性和稳定性良好。