抗人ILT-4单克隆抗体制备及初步鉴定

目的:制备抗人ILT4分子单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,制备小鼠源性抗人ILT4 mAb。用间接ELISA法测定腹水mAb的效价。以Western blot测定mAb的抗原结合活性。通过流式细胞术(FCM)对mAb结合转染细胞表面及天然细胞表面ILT4分子的活性进行鉴定。结果:获得7株分泌抗ILT4 mAb的杂交瘤细胞株。ELISA法测定腹水mAb的效价均达1×10-6,7株mAb均为IgG1(κ)。Western blot结果显示,3株mAb与人ILT4有良好的结合活性。用转染细胞及U937细胞做FCM分析发现另外4株mAb可结合真核表达的及天然的ILT4分子。结论:获得7株能特异性识别ILT4分子的mAb,为研究ILT4分子的组织分布和功能研究提供了可靠的实验手段。