家蚕细胞色素P450 CYP337A1的原核表达

以含有CYP337A1基因完全编码框的克隆载体质粒DNA为模板进行PCR扩增,产物经TA克隆测序鉴定后,亚克隆至原核融合表达载体PET50(b)(含有编码64.3 kD的Nus.Tag蛋白标签)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达。利用SDS-PAGE方法,以空载和未诱导菌体作对照,对细菌总蛋白进行电泳分析,结果表明:经1mmol/L IPTG诱导2h后,即能看到1条大约120 kD的蛋白质特异带,与预计大小一致。进一步利用不同时间、不同温度以及不同浓度的IPTG进行诱导结果比较,发现在诱导时间为2h,温度为32℃,IPTG浓度为0.6 mmol/L的诱导条件下,融合蛋白表达量最大。该实验为利用该基因的蛋白产物进行功能分析创造了条件。