凋亡抑制蛋白生存蛋白-2B在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定

生存蛋白(survivin)属于凋亡抑制蛋白(IAP)家族成员,研究显示, 生存蛋白是迄今为止发现的最强的凋亡抑制因子. 生存蛋白在胚胎组织及恶性肿瘤中普遍表达,如胃癌、结直肠癌、乳腺癌、肺癌等;但在分化成熟的组织及癌旁正常组织中无表达,这一特点使得生存蛋白的靶向治疗具有良好特异性及安全性.尤其是靶向生存蛋白治疗可以促进肿瘤细胞凋亡并抑制其增殖,而对正常组织几乎无不良影响,这一特有的优势使生存蛋白逐渐成为抗肿瘤免疫治疗研究中的一大热点[1～7].生存蛋白的mRNA在体内经过不同的剪切方式可产生3种异构体：生存蛋白、生存蛋白-2B和生存蛋白-EX3,其中以生存蛋白-2B的80～88位氨基酸为特异性靶点的抗肿瘤疫苗已经进入Ⅱ期临床试验阶段[5].我室已经通过大量的文献调研发现,生存蛋白-2B的T细胞抗原表位主要集中在5～28位和80～121位氨基酸之间,故选取这两段区域作为我们的研究靶点,并在GenBank中查找其相应的基因序列,通过连接臂-NG连接后构建成融合基因,基因全长273 bp,由北京擎天生物技术有限公司合成并连接至T-easy载体中.