高胆固醇血症兔外周血内皮祖细胞的体外培养特性

目的研究高胆固醇血症兔外周血内皮祖细胞的分离和定向培养的方法,并对其功能进行鉴定。方法高胆固醇饮食组和正常饮食组兔各6只,用密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞,接种于纤连蛋白包被的培养板上,予EBM-2条件培养基培养。培养2周后进行免疫荧光染色鉴定内皮祖细胞和流式细胞仪检测细胞表型,MTT法检测其增殖能力,改良的Boyden小室法测定其迁移能力,硝酸酶还原法测定一氧化氮浓度。结果高胆固醇饮食组兔的总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇水平较正常饮食组兔明显升高(P<0．05)。单个核细胞接种后7-8 d梭形细胞增多,第14天左右梭形细胞进一步增多,有的相互间连接成血管样结构,有的呈铺路石样分布。免疫荧光染色显示细胞可同时摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和结合FITC标记的凝集素者,表明为正在分化的内皮祖细胞,光学显微镜下计数高胆固醇血症较正常饮食组兔明显减少(14．4±1．1比24．2±1．1／视野,×400) (P<0．05);且CD34+的细胞较正常组低[(16．03±2．87)％比(36．33±6．62)％,P<0．05]。高胆固醇血症兔内皮祖细胞的增殖能力(0．24±0．06比52．00±0．03)、迁移能力(15．4±5．6比32．7±3．2)和分泌的一氧化氮[(9．24±2．06)μmol/L比(21．59±2．85)μmol几]均较正常对照组低(P<0．05)。结论高胆固醇血症时内皮祖细胞的数量减少,且功能发生减退,可有助于动脉粥样硬化的发生和发展。