血栓闭塞性脉管炎患者血浆源性外泌体miR-223-5p对人血管平滑肌细胞的影响

目的 探究血栓闭塞性脉管炎(thromboangiitis obliterans,TAO)患者血浆源性外泌体中miRNAs对人血管平滑肌细胞(human vascular smooth muscle cell,HVSMC)的影响.方法 从TAO患者和健康对照的血浆中提纯外泌体,进行miRNA测序.通过生物信息学分析鉴定差异表达的miRNA(differentially expressed miRNA,DE-miRNA),用RT-qPCR进一步验证.将PKH67荧光标记的外泌体与HVSMC共培养,采用CCK-8法和流式细胞术分别检测HVSMC的细胞活力和凋亡.使用双荧光素酶报告分析并确认miR-223-5p的下游靶点.结果 在TAO患者和健康对照之间共发现39个DE-miRNA,其中miR-223-5p是显著上调的miRNA.TAO患者血浆外泌体或miR-223-5p模拟物能降低HVSMC的细胞活力并促进细胞凋亡,miR-223-5p抑制剂可削弱TAO患者血浆源性外泌体的抑制和促凋亡作用.血管内皮细胞黏附分子1(vascular endothelial cell adhesion molecule-1,VCAM-1)和胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)的表达被TAO患者血浆源性外泌体和miR-223-5p模拟物下调,这一下调作用可被miR-223-5p抑制剂所抑制.双荧光素酶报告提示VCAM-1是miR-223-5p的靶点.结论 TAO患者血浆源性外泌体可能通过miR-223-5p/VCAM-1途径抑制HVSMC的细胞活力并促进细胞凋亡,从而在TAO的发生发展中起作用.