类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的表型及其侵蚀软骨的特性

目的:分离培养类风湿关节炎(RA)滑膜细胞、检测其表面标志及研究其对软骨的侵蚀特性。方法:取6例RA患者滑膜,分别采用组织块、胰蛋白酶消化及胶原酶、胰蛋白酶先后消化培养后,用相差显微镜观察细胞的形态、用流式细胞术(FCM)检测培养细胞表面标记CD3、CD19、CD14、CD68、CD44、CD55、CD90及细胞内脯氨酰-4-羟基化酶(Prolyl-4-hydroxylase)的表达并与传统的免疫组化染色法检测波形蛋白的表达相比较。并用SCID小鼠研究成纤维样滑膜细胞(FLS)对软骨的侵蚀作用。结果:(1)3种方法均分离出FLS,胶原酶与胰蛋白酶先后消化法分离细胞所需时间少、获得的细胞数多、纯度较高。(2)第2代细胞与第3代细胞的均质性分别达90%及98%以上。(3)在第3~6代的细胞比较稳定,增殖活跃;第7代以后增长缓慢,逐渐老化。(4)流式细胞术分析显示,原代细胞随着传代次数的增加逐渐纯化,第3~6代CD90+细胞>98%,脯氨酰4-羟基化酶+细胞>98%;与免疫组化检测波形蛋白的表达相一致。(5)将第4~5代的细胞和软骨一起植入SCID小鼠,或单独注入SCID小鼠的膝关节,都可导致软骨的浸蚀性破坏。结论:以胶原酶与胰蛋白酶先后消化分离FLS,效果较好,CD90、脯氨酰4-羟基化酶可作为鉴定FLS的标志。用SCID小鼠可研究FLS对软骨的侵蚀特性。