从角膜组织中快速检测HBV、HCV的方法探讨

目的:运用多重巢式PCR技术,同步检测人组织中的乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒,为角膜移植供体组织材料中乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的快速筛查建立方法。方法:参照相关文献和G enbank公布的乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒全基因序列,分别设计并合成乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的半巢式和巢式引物。供体角膜周边组织材料2份,由河南省眼科研究所眼库提供。角膜供体年龄为18~45岁。以上角膜材料均由河南省各地、市级医院送来,供体人员生前是否患有乙型肝炎和/或丙型肝炎均情况不明。在得到角膜周边组织材料后,每份迅速切取10 m g左右置于无菌研磨器内研磨,用一步法快速提取基因组DNA和总RNA。首次完成丙型肝炎病毒的反转录cDNA,然后在同一反应体系内同时加入乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒引物,采用“双退火温度”,共35个循环,进行两轮巢式扩增。结果:在32份样本中,乙型肝炎病毒阳性为3份(阳性率9.3%);丙型肝炎病毒均为阴性(阳性率0%)。结论:从角膜周边组织中提取基因并用于乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的组织快检,可扩大用于角膜移植材料的来源。运用多重巢式PCR技术对角膜供体材料中DNA和RNA的组织快检,具有方法简便、灵敏度高、出结果快、经济等优点,具有推广应用价值。