流式微球技术检测血小板微粒的方法建立及其评价

目的建立血小板微粒(plateletderivedmicroparticles,PMPs)的流式微球技术(cytometricbeadarray,CBA)检测方法并对其进行方法学评价。方法采用包被针对血小板膜糖蛋白Ⅲa(CD61)单克隆抗体的检测微球捕获PMPs,用CD41PE结合捕获的PMPs,利用流式细胞仪对微球PMPsCD41PE复合物进行检测。通过试验优化检测条件;并对方法的重复性和检测线性进行评价。对45例健康人PMPs水平进行检测。结果检测微球在4℃可以稳定保存90d以上,变异系数0.65%,基本可以满足临床检测的要求。应用CTAD抗凝管采集标本可以有效的抑制PMPs的体外释放;室温反应4h可以达到PMPs最大的结合;利用PBS洗涤可以去除检测微球对PMPs的非特异性吸附。该方法批内变异系数6.8%;批间变异系数10.4%,有较好的重复性;利用该方法检测血小板活化上清中的PMPs,在0～200μl之间有较好的线性(r=0.9962)。45例正常健康成人血液PMPs参考范围为1.031～1.766(相对荧光强度)。结论流式微球技术可以简便、快捷、准确地检测PMPs,对于临床出血、血栓性疾病的诊治具有重要意义。