转新疆雪莲去饱和酶基因sikSAD重组酵母低温和酒精耐受性分析

根据GenBank收录的sikSAD基因序列,采用反转录PCR技术从新疆雪莲(Sasussured involucrata Kar.et Kir)中克隆了sikSAD基因,并构建了pYES2-sikSAD大肠杆菌/酵母穿梭表达载体,通过电击法转化酿酒酵母S288C菌株,并利用PCR和SDS-PAGE对转化酿酒酵母进行鉴定,最后通过低温胁迫和酒精胁迫进行抗性初步分析及方差分析。结果表明:低温胁迫实验中,转sikSAD基因酿酒酵母在低温条件下仍能存活,并且在温度恢复到28°C时能迅速生长,生长状态良好,不饱和脂肪酸油酸的含量有明显的变化。酒精胁迫实验中,其能耐受一定浓度的酒精,并且耐受能力比非转基因酿酒酵母提高了十几个百分点。可见,在低温胁迫和高浓度酒精条件下,转新疆雪莲sikSAD基因酿酒酵母表现出了优良的活性和生长优势,显示出较强的抗性特征,用分子手段改造酿酒酵母,为工业生产提供高质量的酿酒酵母奠定实验基础。