食蟹猴精原干细胞体外培养体系的初步建立

为了掌握食蟹猴(Macaca fascicularis)精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养生长特性,并建立其培养体系。手术法获得幼年期食蟹猴单侧睾丸,改良的两步酶消化法获得其细胞悬液,添加特定培养液进行体外培养,以碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定培养细胞,并评价不同饲养层细胞和不同接种密度对SSCs体外培养的增殖效果。结果表明,含10%FCS等补充物的DMEM液可支持食蟹猴SSCs的体外存活与增殖,培养3～5 d可观察到SSCs集落,AKP染色呈阳性;以支持细胞为饲养层体外培养SSCs 3 d和7 d,SSCs集落形成率均显著高于皮肤成纤维细胞饲养层(P<0.05),且以1×105个/mlSSCs接种密度是较好的原代培养开始。该培养体系的初步建立可为体外研究非人灵长类精子发生机制和SSCs基因修饰提供便利。