一种适用于家蚕微孢子虫膜蛋白提取的方法

细胞膜蛋白在家蚕微孢子虫对宿主细胞的抵抗性、物质能量转运和信息传递过程中发挥着重要作用,也是家蚕微粒子病诊断防控的重要候选靶标。依次采用试剂盒直接抽提法、破碎抽提同步法、破碎抽提异步法,对家蚕微孢子虫膜蛋白提取过程中的抽提时间和孢壁处理方式进行优化,通过对提取蛋白质样品的质量检测,明确最佳提取方法。SDS-PAGE检测结果表明,采用破碎抽提异步法在Buffer 2B抽提40 min时能获得较高丰度的膜蛋白,与孢子总蛋白质相比,所得膜蛋白样品中含有丰富的大小为30～170 kD的差异蛋白,进一步利用已知家蚕微孢子虫膜蛋白——类枯草杆菌蛋白酶2的抗体(anti-Nb-SLP2)进行Western blotting分析发现,膜蛋白样品中含有丰富的NbSLP2,表明破碎抽提异步法适用于孢子膜蛋白的提取。此方法的建立将有助于对家蚕微孢子虫膜蛋白的鉴定和功能研究及检测防控候选膜蛋白靶标的筛选。