放射性肝损伤的血清比较蛋白质组学分析

目的:通过分离、鉴定及验证SD肝硬化大鼠肝脏放疗前后血清差异蛋白质的表达,探讨可能用于检测及监控放射性肝损伤的早期生物学指标.方法:8只健康成年SD大鼠皮下注射四氯化碳(CCl4),连续6周,建立肝硬化模型后随机分组,每组4只,即对照组和实验组.对照组大鼠(CCl4组)未给予放疗,实验组大鼠(CCl4+放疗组)行半肝照射,单次剂量15 Gy.6 h后分别提取2组大鼠的血清总蛋白,进行比较蛋白质组学分析.采用双向凝胶电泳分离蛋白,经图像分析识别2组大鼠放疗前后差异表达的蛋白质.应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALD-TOF-MS)鉴定差异蛋白质.应用Western blotting对血清中乙酰肝素酶和肝细胞生长因子受体的表达水平进行验证.结果:获得了分辨率和重复性均较好的凝胶蛋白图谱.共筛选出33个在实验组明显差异表达的蛋白点,其中12个蛋白质鉴定成功.在这12个蛋白质中,实验组中5个表达上调,7个表达下调.Western blotting进一步证实了实验组乙酰肝素酶表达上调,肝细胞生长因子受体表达下调.结论:成功鉴定了12个与放射性肝损伤相关的蛋白.乙酰肝素酶和肝细胞生长因子受体可能作为预测及监控放射性肝损伤的早期指标.临床上要将二者作为可能的生物学标志物,其敏感性和特异性还有待进一步研究.