人表皮角质形成细胞自噬功能细胞模型的构建及鉴定

目的:建立稳定表达GFP-LC3的人永生化角质形成细胞HaCaT细胞系.方法:将构建的pcDNA3.1-GFP-LC3真核表达载体转入HaCaT细胞,经G418筛选稳定表达的细胞系.HaCaT细胞中GFP-LC3的表达分别用荧光显微镜与Western blot方法检测,并利用该稳定表达的细胞系观察验证Rapamycin对细胞发生自噬透射电镜超微结构的变化.结果:获得了3株转染并经G418反复筛选的HaCaT细胞系,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光细胞的表达率在95％以上,Western blot结果证实了GFP-LC3融合蛋白的表达.Western blot和激光共聚焦显微镜均证明Rapamycin可以诱导自噬的发生.透射电镜细胞超微结构的观察表明Rapamycin可以有效地诱导HaCaT-LC3细胞自噬的发生.结论:成功构建GFP-LC3稳定表达的HaCaT系,该细胞系可以作为研究人角质形成细胞自噬功能的一种细胞模型.