人白介素-17B真核蛋白表达及生物学功能的初步研究

目的:在真核细胞中表达hIL-17B/mFc融合蛋白并初步研究IL-17B生物学特性。方法:应用RT-PCR法克隆hIL-17B的CDS段基因序列。将测序正确的hIL-17B序列插入pCEP4质粒构建pCEP4/hIL-17B真核表达载体。转染人肾上皮293T细胞后,筛选阳性表达细胞株。RT-PCR、ELISA和Western blot等法鉴定hIL-17B分子的mRNA和蛋白水平表达。体外和体内实验验证其生物学功能。结果:成功构建了pCEP4/hIL-17B重组表达载体,并在293T细胞中稳定表达。获得的hIL-17B重组蛋白能稳定结合人单核THP-1细胞系上IL-17B受体。体外刺激THP-1,能显著促进IL-1β和TNF-α等炎症因子的分泌。体内实验发现其具有促进中性粒细胞迁移的作用。结论:稳定表达hIL-17B重组蛋白的293T细胞系的建立,为进一步研究hIL-17B的生物学功能奠定了良好的基础。