毛皮中6种致病菌基因芯片检测方法的建立和应用

为建立同时检测皮毛中携带的布鲁氏菌、大肠杆菌O157、金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、丹毒杆菌、铜绿假单胞杆菌6种致病菌的基因芯片检测方法,本研究根据NCBI中细菌的16S rDNA和gyrB基因序列,分别设计通用引物和特异性寡核苷酸探针。点样制备检测基因芯片,核酸杂交后,优化并建立同时检测6种致病菌的基因芯片方法。结果表明:使用47%甲酰胺杂交液,42℃摇转杂交4 h为最佳杂交条件。建立的基因芯片方法在多种致病菌之间无交叉反应,检测敏感性可达10拷贝。制备的基因芯片稳定,有效保存期为6个月。该基因芯片对临床样品的检测结果与PCR平行检测结果的符合率为100%。本研究建立的基因芯片检测皮毛中6种致病菌的方法具有高通量、灵敏和特异的特点,为临床皮毛中致病菌的检测和监控提供了新的检测方法。