Tudor-SN蛋白TSN结构域亚结构片段重组质粒的构建与表达

研究人类Tudor-SN蛋白TSN结构域4个亚片段的功能,构建重组质粒pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN (I-Ⅳ).方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增出目的基因,将双酶切后带有粘性末端的目的片段和pEGFP-C2载体连接,从而构建重组质粒pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN(Ⅰ-Ⅳ).将构建成功的重组质粒用脂质体法转染HeLa细胞,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况,Western印迹检测融合蛋白的表达.结果:对重组质粒进行双酶切鉴定可见Tudor-SN-TSN(Ⅰ -Ⅳ)的cDNA片段；脂质体转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达.Weskrn印迹后可在相应位置检测到融合蛋白pEC FP-C2-Tudo-SN-TSN(Ⅰ-Ⅳ).结论:真核pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN(Ⅰ～Ⅳ)重组质粒构建及表达成功.