温度时间及~(125)I-AS浓度对ECV304细胞AS受体内化的影响

目的探讨温度、时间及125碘-血管抑素(125I-angiostatin,125I-AS)浓度等因素对人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞血管抑素(angiostatin,AS)受体内化的影响。方法利用弹性蛋白酶有限水解法制备AS,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定,Ch-T法进行125I标记,纸层析法测标记率,Sephadex-G50柱纯化,将纯化产物分别加入牛血清白蛋白(BSA)、生理盐水及不同物质的量比的半胱氨酸,以观察其体外稳定性。利用放射性配基结合分析法,以125I-AS为放射性配基,于4、24、37℃条件下,固定浓度125I-AS与ECV304细胞共同保温不同时间后,分别检测细胞的受体内化率;37℃条件下,不同浓度125I-AS与ECV304细胞共同保温不同时间后,分别检测细胞的受体内化率。结果蛋白水解产物凝胶电泳相对分子质量为38×103,标记率可达85%,标记产物在体外较稳定。4℃时,受体内化率较低,24℃时,受体内化率有所增加,37℃时,受体内化率较高;37℃时,随125I-AS浓度增大,受体内化率降低(P<0.01);不同温度、浓度时,受体内化率均随时间延长而增加(P<0.01,P<0.05)。结论ECV304细胞AS受体内化受温度、时间及125I-AS浓度等因素影响,呈温度-效应、时间-效应关系,与125I-AS浓度呈负相关。