重组腺病毒表达的融合蛋白SH2-caspase 8对K562细胞凋亡的影响

目的 研究表达融合蛋白SH2-caspase 8的重组腺病毒AdE-SH2-caspase 8-HA-GFP(SC)对BCR/ABL阳性的慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的影响.方法 将重组的腺病毒SC转染K562细胞(SC组),分别设突变AdE-SH2m-caspase 8-HA-GFP (SmC)组、病毒空载体AdEGFP(CMV)组和PBS对照组.用荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测病毒转染效率,western blot检测融合蛋白及凋亡相关蛋白caspase3、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)的表达情况,用光学显微镜观察经瑞氏染色后的细胞形态,FCM和DNA梯度电泳检测细胞凋亡情况.结果 FCM和荧光显微镜检查结果显示,重组腺病毒在K562细胞中的转染效率较高；融合蛋白SH2-caspase8-HA和SH2m-caspase8-HA可在K562细胞中表达；瑞氏染色后SC组出现明显的凋亡形态改变；FCM检测结果表明,SC组与SmC组、CMV组和PBS组相比较,其早期凋亡细胞明显增高(t分别为6.945、19.083和16.470,P均＜0.05),DNA梯度电泳检测结果发现SC组和SmC组可出现细胞凋亡特异性的梯度条带,western blot结果表明,SC组和SmC组凋亡相关蛋白caspase 3、PARP活化片段的表达水平升高.结论 重组腺病毒SC表达的SH2-caspase8融合蛋白能明显诱导K562细胞的凋亡.