神经胶质瘤U251细胞氧化损伤中自噬和凋亡过程的时间顺序

目的:探讨过氧化氢(H2O2)诱导神经胶质瘤U251细胞损伤中自噬和凋亡发生的时间顺序。方法:实验分为4组:正常对照组、1 mmol/L H2O2作用(6 h、12 h、24 h)组。应用MTT法检测H2O2对神经胶质瘤U251细胞生存率的影响;MDC染色检测自噬空泡的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率变化。Western blot检测Beclin 1和胞浆cyt c蛋白的表达。结果:与对照组相比,1 mmol/L H2O2作用下,U251细胞存活率明显降低,并呈时间依赖性。与对照组相比,1 mmol/L H2O2作用后,6 h时U251细胞自噬空泡明显增加,自噬相关蛋白Beclin 1表达明显增加,12 h、24 h细胞自噬水平逐渐增强;而6h时未见细胞凋亡率明显变化及cyt c由线粒体向胞浆的释放,12 h、24 h时细胞凋亡率明显增加,胞浆中cyt c蛋白表达明显增强(P<0.05)。结论:氧化损伤能够诱导神经胶质瘤U251细胞发生自噬和凋亡,并且自噬发生于凋亡之前。