幽门螺杆菌NCTC11637株Hp1501蛋白的原核表达与纯化

目的原核表达并纯化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)NCTC11637株Hp1501蛋白。方法 PCR扩增H.pylori NCTC11637株Hp1501基因编码功能区序列Hp1501a,定向克隆至pQE30载体,构建重组原核表达质粒pQE30-Hp1501a,转化E.coli XL1-blue,IPTG诱导表达,并分析重组蛋白的表达形式。用Ni-NTA His柱对重组蛋白进行纯化。结果重组表达质粒pQE30-Hp1501a经双酶切鉴定构建正确,测序分析表明插入基因序列完全正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为37 000,表达量约占菌体总蛋白的21%,主要以包涵体形式存在,可与兔抗His单克隆抗体特异性结合;纯化的重组蛋白纯度达91%。结论成功原核表达并纯化了H.pylori NCTC11637株Hp1501蛋白,为H.pylori外膜蛋白的生物学功能和疫苗的研究奠定了基础。