CIITA基因沉默对小鼠骨髓来源的树突状细胞表型及功能的影响

研究MHCII类反式作用因子(CIITA)基因干扰对小鼠骨髓来源的树突状细胞(dendritic cells,DC)的表型及功能的影响。体外培养小鼠骨髓来源DC,将CIITA siRNA通过脂质体法转染DC,实时荧光定量PCR(qPCR)、western Blot及流式细胞术(FCM)检测转染前后CIITA mRNA、蛋白表达量及MHC-II分子表达;混合淋巴细胞反应检测干扰CIITA基因后的DC对异基因淋巴细胞增殖能力的影响,ELISA检测共培养上清中细胞因子IL-4、IFN-γ和IL-10的表达水平。qPCR结果显示,DC转染CIITA siRNA后,CIITA mRNA与control siRNA组相比明显降低;western blot结果显示转染CIITA siRNA后,DC中的CIITA的蛋白表达量降低,FCM结果显示,转染的DC表面的MHC-II分子表达降低,同时CD40、CD80/CD86分子表达也有一定的降低;转染CIITA siRNA的DC,其刺激异基因淋巴细胞的增殖能力与对照组DC相比显著减弱,细胞产生IL-4和IL-10的水平提高而IFN-γ的水平降低。表明CIITA siRNA通过抑制DC的CIITA基因表达来降低MHC-II及共刺激分子CD40、CD80/CD86分子水平,减弱DC将抗原提呈给T细胞的能力,从而使免疫反应处于低激活状态。