E1A激活基因阻遏子对抗肿瘤坏死因子α引起的血管内皮细胞炎性损伤

目的探讨E1A激活基因阻遏子表达对血管内皮细胞病理性炎症反应的生物学作用及机制。方法以E1A激活基因阻遏子过表达和基因沉默的人动脉血管内皮细胞为细胞模型,应用肿瘤坏死因子α刺激,ELISA检测白细胞介素6的变化,Rhodamin-Phalloidin检测肌动蛋白骨架F-actin分布,应用Transwell小室和Biotin标记的BSA检测单层内皮细胞通透性改变。进一步通过免疫荧光染色和Western blot检测细胞内核因子κB蛋白表达和转位情况。结果 ELISA检测发现,E1A激活基因阻遏子基因过表达显著抑制肿瘤坏死因子α刺激引起血管内皮细胞白细胞介素6的表达及分泌增加。同时,细胞F-actin应力纤维的形成和细胞单层通透性增加受到明显抑制。相反,E1A激活基因阻遏子基因沉默组白细胞介素6分泌较对照组明显增多。细胞F-actin应力纤维形成、细胞单层通透性显著增加。免疫荧光和Western blot分析证实,肿瘤坏死因子α刺激后,E1A激活基因阻遏子过表达组核因子κB出现短时的入核现象并迅速出核,对应蛋白出现相应的表达变化,而E1A激活基因阻遏子基因沉默组核因子κB表达持续增高且发生明显的入核转位现象。结论 E1A激活基因阻遏子可通过减少核因子κB的表达对抗肿瘤坏死因子α刺激引起的血管内皮细胞炎症反应和细胞通透性增加,对抗细胞病理性损伤发生。