金黄色葡萄球菌膜蛋白nEBPS原核表达及抗体制备

目的:构建金黄色葡萄球菌弹性纤维结合蛋白N端蛋白(N-terminal elastin binding proteins of S.aureus,nEBPS)的原核表达系统,制备其多克隆抗体。方法:设计引物,PCR方法扩增nEBPS基因(nebps),分别构建克隆载体pMD19-T(+)/nebps和原核表达载体pQE30(+)/nebps,经PCR、双酶切和测序鉴定后,阳性表达载体转化大肠杆菌表达宿主菌M15[pREP4],经1mM异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western Bloting,WB)分析鉴定,经镍螯合亲和层析(Ni-NTAAgrose)纯化后再用SDS-PAGE和WB法鉴定。制备抗原,免疫新英格兰白兔,得到抗血清并对其进行鉴定。结果:pQE30(+)/nebps重组表达载体构建成功,目的蛋白在构建的原核表达系统中较高表达,纯化后得到高纯度的nEBPS,免疫动物后得到理想的多克隆抗体。结论:通过基因重组技术,金黄色葡萄球菌膜蛋白nEBPS在构建的原核表达系统M15[pREP4]中得以成功表达,并获得了高纯度的目的蛋白及其多克隆抗体。