流式细胞术测定蠕形螨基因组大小

目的采用流式细胞术(FCM)测定蠕形螨基因组大小,为构建蠕形螨基因文库和筛选功能基因奠定基础。方法自然沉降法清洗收集蠕形螨,组织匀浆器和超声波破碎螨体,在柠檬酸介质中分离蠕形螨的细胞核。以家鸡血细胞核DNA含量为内标,用FCM测定经碘化丙啶(PI)染色的家鸡血细胞核和蠕形螨细胞核混合样品发出的PI荧光强度,通过比较蠕形螨与家鸡血细胞DNA含量峰值的倍数关系,计算出蠕形螨的基因组大小。结果采用FCM测得蠕形螨DNA含量约为1.05 pg/2C,以1 pg DNA相当于978 Mb计算得出蠕形螨基因组大小约为512 Mb。结论流式细胞术可快速、精确测定蠕形螨基因组大小,为蠕形螨基因组研究奠定了基础工作。