鸡IFN-γ基因重组蛋白复性条件的优化及生物活性鉴定

为提高鸡IFN-γ基因重组蛋白的复性效率,用18种不同的复性缓冲液对在大肠埃希菌中表达的cIFN-γ进行复性处理,通过SDS-PAGE分析、考马斯亮蓝定量、对鸡胚成纤维细胞以及对鸡胚的保护试验检测复性产物的得率和生物学活性。结果表明,去污剂和疏水剂能保证蛋白的复性得率和复性效率,重组表达产物得率可高达94.7%;氧化还原电势是cIFN-γ成功复性的关键,有生物学活性的复性产物的复性液中均存在氧化还原对GSSG/GSH;经去污剂处理后再复性的产物对细胞保护的有效浓度显著低于直接复性的蛋白。