抗重组志贺样毒素ⅡA亚单位单链抗体的构建及表达

目的构建重组志贺样毒素ⅡA亚单位(SLT2A)单链抗体基因(scFv),并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法通过连接肽(Gly4Ser)3将已成功扩增的抗SLT2A单克隆抗体(mAb)5F3的VL和VH连接成scFv基因VHLinkerVL,并在VH基因5′端和VL基因3′端引入SfiⅠ和NotⅠ的酶切位点,克隆至经改造的分泌性表达载体pCANTAB6His中,转化EcoliHB2151,IPTG诱导表达。表达产物经亲和层析纯化后,SDSPAGE和Westernblot分析鉴定。结果经限制性酶切鉴定及DNA测序分析证实,基因构建正确。SDSPAGE和Westernblot分析表明scFv基因在大肠杆菌中得到表达,表达产物的相对分子质量为27000,与理论预期值相符,且可与相应抗原特异结合。结论成功地实现了抗SLT2AscFv基因的原核分泌表达,为探讨O157菌感染的机制及防治研究奠定了基础。