幽门螺杆菌脂蛋白基因的重组表达和免疫活性鉴定

目的 制备幽门螺杆菌(Hp) Lpp20重组蛋白(rLpp20),鉴定其免疫活性,为Hp疫苗和免疫诊断研究提供候选抗原.方法采用基因克隆技术将Hp lpp20基因克隆到表达载体pMAL-c2X中,用重组质粒转化E.coli TB1.采用IPTG诱导lpp20基因与麦芽糖结合蛋白(Maltose binding protein,MBP)基因融合表达,用多糖树脂亲和层析方法纯化表达的融合蛋白(MBP-rLpp20).将MAP-rLpp20用蛋白因子Factor Xa酶切,得到不带MBP的rLpp20.分别用MAP-rLpp20、rLpp20和Hp全菌抗原免疫小鼠,用Western blot检测MBP-rLpp20和 rLpp20的抗原活性.结果表达的MBP-rLpp20的相对分子质量为60×103,表达量占菌体总蛋白的34.1%,占可溶性蛋白的14.2%.经酶切和纯化得到的rLpp20的相对分子质量为15×103.纯化制备的MBP-Lpp20 和rLpp20的纯度分别为90.4%和91.2%,且与相应免疫小鼠血清及Hp全菌抗原免疫小鼠血清均能发生阳性反应.结论该研究成功制备了纯度较高的MAP-Lpp20和rLpp20蛋白;这两种重组蛋白均具有免疫活性,对Hp疫苗和免疫诊断研究具有应用价值.