人Kin17蛋白的原核表达及纯化

目的:构建重组质粒,在原核系统中表达带His标签的人Kin17融合蛋白,并对表达产物进行纯化及鉴定。方法:以PK3质粒为模板,PCR扩增出全长的KIN17基因,并将PCR产物插入到原核表达载体pET32a中,构建的重组质粒经BamHⅠ/HindⅢ双酶切及DNA测序方法鉴定正确后,转化至大肠杆菌BL21,并用丙基-β-硫代半乳糖苷诱导表达His-Kin17融合蛋白,最后应用Ni-NTA柱亲和层析方法来纯化融合蛋白及经Western免疫印迹鉴定纯化的重组蛋白。结果:双酶切及DNA测序方法证实pET32a-KIN17质粒构建正确,融合蛋白经诱导表达、纯化、鉴定后,得到纯度达到95%以上的His-Kin17重组蛋白。结论:成功构建携带KIN17基因的重组载体,并获得了高纯度的His-Kin17重组蛋白,为深入研究Kin17蛋白的分子结构、功能及其在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。