Fiabilisation de l’analyse delegionella pneumophiladans les eaux résiduaires : évaluation de différentes méthodes de préparation d’échantillons

La quantification de Legionella pneumophila dans les echantillons d'eaux residuaires selon les methodes normalisees existantes (normes NF T90-431 et XP T90-471, respectivement basees sur la mise en culture et la PCR quantitative) sont rendues difficiles, du fait notamment de l'heterogeneite et la richesse en inhibiteurs (microorganismes susceptibles de generer une flore interferente et composes organo-mineraux inhibant l'amplification PCR). Or, la recherche des sources de contamination lors d'episodes epidemiques de legionellose necessite de disposer de methodes fiables pour l'analyse de ce type de matrices. Sur la base de la methode normalisee NF T90-431 (2003), les temps de contact et l'intensite des parametres physico-chimiques (temperature, pH acide) instaurant une pression selective favorable a la croissance des legionelles sur milieu de culture ont ete optimises. De meme, l'application de la PCR quantitative sur ces matrices a necessite l'evaluation et la comparaison de differents procedes d'extraction - purification d'ADN. Applicable en amont de la PCR, la separation immunomagnetique (IMS), basee sur la reconnaissance specifique antigene-anticorps, offre une solution alternative pour la concentration de L. pneumophila en permettant l'elimination d'une grande partie de la matiere organique en suspension potentiellement inhibitrice de la PCR. Les developpements analytiques ainsi obtenus permettront d'acceder a des matrices naturelles dont la complexite limitait le nombre d'analyses realisees et empechait jusqu'a present de disposer de resultats fiables.