猪Gpr6基因的克隆及表达分析

为了探明G蛋白偶联受体6基因(Gpr6)的结构、功能与表达模式,克隆了含有完整阅读框的猪Gpr6的cDNA序列。利用生物信息学方法对Gpr6基因的结构及功能进行了系统研究,运用Real-time PCR技术对其在组织中的表达规律进行了分析,并利用构建的原核表达载体pET32a-Gpr6对其在BL21菌株中的最佳蛋白表达条件进行了筛选。结果表明:猪Gpr6基因的cDNA序列由1 664个核苷酸组成,编码366个氨基酸残基,等电点为7.63,相对分子质量为38.38×103,与牛、犬、人、黑猩猩、大鼠和小鼠的氨基酸相似性分别为91.2%、89.5%、88.3%、88.3%、86.3%和86.1%。猪Gpr6基因在各组织中均有表达,但仅在下丘脑、垂体和肝脏中表达量较高。经原核表达分析,发现成功获得了相对分子质量约为27 000的Gpr6蛋白,并且确定了该蛋白的最佳表达条件为0.8 mmol.L-1IPTG,37℃诱导表达2 h。