应用正交设计对大白菜纯度鉴定中EST-SSR反应体系的优化

以3份大白菜杂交种及其亲本为试验材料,利用改良CTAB法提取基因组DNA,采用正交设计对Mg2+、dNTPs、引物、模板DNA和Taq酶5因素4水平进行优化,结果表明,适用于大白菜纯度鉴定EST-SSR检测体系为:在10μL反应体系中包含3.0 mmol·L-1MgCl2、400 μmol·L-1dNTPs、0.20 μmol·L-1 SSR引物、4 ng模板DNA和0.05 U Taq酶.利用该优化的体系,对3份大白菜杂交种进行单株育苗试验,每份杂交种取单株140株进行纯度鉴定.结果显示,扩增带型清晰、稳定,纯度检测结果与田间试验结果基本吻合,可用于大白菜种子纯度分子标记的进一步研究.