人fgl2凝血酶原酶基因的真核表达及其凝血功能研究

目的将人fgl2凝血酶原酶基因进行真核表达,了解表达蛋白的分布特点,初步研究其凝血活性。方法将pcDNA3-fgl2重组质粒转化大肠埃希菌,利用脂质体转染至HL-60细胞;RT-PCR法检测其fgl2凝血酶原酶mRNA的表达,间接免疫荧光法标记fgl2凝血酶原酶蛋白,应用激光共聚焦显微镜观察其分布,流式细胞仪检测fgl2凝血酶原酶蛋白在细胞膜的表达;并通过检测转染细胞的促凝活性(PCA)分析其凝血功能。结果 pcDNA3-fgl2真核表达质粒在HL-60细胞中进行了瞬时表达,转染细胞可见明显的fgl2凝血酶原酶mRNA条带。激光共聚焦显微镜观察到转染细胞胞质中可见明显的绿色荧光,流式细胞仪在转染细胞胞膜上未检测到明显的蛋白表达。转染pcDNA3-fgl2重组质粒细胞的PCA明显增高且依赖于凝血酶原。结论成功地将fgl2凝血酶原酶基因在HL-60细胞中进行了瞬时表达;fgl2凝血酶原酶主要在胞质中表达,细胞膜上无分布并可能分泌到细胞外;凝血功能分析显示fgl2凝血酶原酶具有直接激活凝血酶原的功能。