丙型肝炎病毒P7蛋白体外原核表达状况的研究

目的:扩增丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)P7蛋白基因,克隆到多个原核表达系统,观察P7蛋白在体外表达的情况,获取具有生物学活性的HCV P7重组蛋白.方法:设计扩增全长HCVP7基因片段的特异引物,以H/FL质粒DNA(含HCV 1acDNA全长序列)为模板,通过PCR扩增全长HCVP7基因,定向克隆到pQE30、pGEX 4T-2、pET32a(+)3种不同类型的原核表达载体中.将重组后包含HCVP7基因的原核表达载体转化表达型大肠杆菌BL21(DE3)pLysS或SG13009(PREP4),并做异丙基硫化-β-D-半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-thiogalactoside,IPrG)诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定HCV P7蛋白原核表达的情况.结论:获得可溶性的重组蛋白GST-HCV P7和Trx-HCV P7,为进一步研究P7蛋白的生物学功能奠定基础.