大肠杆菌UDP-葡萄糖脱氢酶基因的克隆、表达及酶活性测定

UDP-葡萄糖脱氢酶(UDP-GlcDH)是透明质酸合成过程中关键的限速酶,可以将UDP-葡萄糖催化生成透明质酸必需的前体物质UDP-葡萄糖醛酸。分别采用大肠杆菌BL21(DE3)和YK537的基因组DNA为模板,通过PCR获得BL21(DE3)和YK537的UDP-GlcDH基因ugd,并采用分子生物学方法分别将两种菌株的ugd基因插入含有PL启动子的pBLMVL2载体中,分别获得重组质粒pBLBugd和pBLYugd,再分别转化于大肠杆菌BL21(DE3)和YK537中,获得4株重组菌;采用升温诱导表达UDP-GlcDH,并测定不同重组菌株的UDP-GlcDH的活性,探索出不同温度诱导条件下UDP-GlcDH的表达量及活性差异。结果表明,采用双阶段升温诱导方式并添加适量酵母粉可以显著提高重组菌表达UDP-GlcDH的活性。